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3 1 1 8己二酰胼含量測(cè)定法

本法系依據(jù)在四硼酸鈉存在的條件下，己二酰肼

(A D H )中的氨基基團(tuán)能與三硝基苯磺酸（TNBS)發(fā)生顯色反

應(yīng)，采用紫外-可見分光光度法測(cè)定b 型流感嗜血桿菌多糖

衍生物中己二酰肼的含量。

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中國(guó)藥典2 0 1 5年版

試劑（1 )己二酰肼對(duì)照品貯備液（lm g /m l) 精密稱定

已二酰肼0. 1 0 0 g ,加水定容至1 0 0m l,于一20°C保存。

(2 )己二酰肼對(duì)照品工作液G C ^ g /m l)精密量取ADH

對(duì)照品貯備液0. 2 m l,加水定容至10ml。

(3 ) 5% 四砸酸鈉溶液稱取四硼酸鈉（Na2B40 7 •

10H2O)47. 3 5 g ,加水定容至5 0 0m l,于室溫保存。

(4)3% TN B S溶液量取TNBS 5ml，加水定容至

5 0m l,于一20°C保存。

測(cè)定法量取5%四硼酸鈉溶液1.0ml，加水lm l，混

勻，再加人3%TNBS溶液0 .3 m l,混勻，于室溫放置1 5分

鐘，上海奧析科學(xué)儀器有限公司紫外分光光度計(jì)UV1902在波長(zhǎng)500mn處測(cè)定吸光度，作為空白對(duì)照。

先將供試品用水稀釋至己二酰肼濃度不高于ZO^tg/ml,

作為供試品溶液，然后取1 .0 m l,加人5% 四砌酸鈉溶液

1 .0 m l,自“加人3% TNBS溶液0.3ml” 起同法操作。

分別取己二酰肼對(duì)照品工作液0.2ml、0.4ml、0.6ml、

0. 8ml、1. Oml于試管中，每管依次加水0. 8ml、0. 6ml、

0.4ml、0. 2ml. O m l,加入5%四硼酸鈉溶液1. O m l,自“加

人3% TNBS溶液0.3ml” 起同法操作。

結(jié)果計(jì)算以己二酰肼對(duì)照品工作液的濃度對(duì)其相應(yīng)的

吸光度作直線回歸，求得直線回歸方程，將供試品溶液的吸

光度代人直線回歸方程，求出供試品溶液的己二酰肼含量，

根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算供試品的己二酰肼含量。